Aktualności

W zależności od różnicy w oznaczaniu antygenów i przeciwciał istnieje wiele automatycznych trybów pomiaru ELISA, takich jak metoda bezpośrednia, metoda pośrednia, metoda kanapkowa z podwójnym przeciwciałem (bezpośrednia, pośrednia), metoda hamowania konkurencyjnego (bezpośrednia, kanapkowa itp.), metoda wychwytywania itp. W laboratoriach klinicznych, Powszechnie stosowane tryby pomiaru ELISA obejmują metodę kanapkową z podwójnym przeciwciałem, metodę pośrednią, metodę kanapkową z podwójnym antygenem, metodę hamowania konkurencyjnego i metodę wychwytywania.

W oznaczaniu antygenów najczęściej stosowanym trybem oznaczania białkowych antygenów makrocząsteczek jest metoda kanapkowa z podwójnym przeciwciałem. W przypadku małych cząsteczek z tylko pojedynczym epitopem stosuje się metodę hamowania konkurencyjnego; Oznaczanie przeciwciał zwykle wykorzystuje metodę pośrednią, metodę kanapkową z podwójnym antygenem, metodę hamowania konkurencyjnego i metodę wychwytywania.

1. Podwójna metoda kanapkowa przeciwciała stacji roboczej ELISA

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the Stacja robocza ELISA uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" Zestaw do badań medycznych.

Obecnie w naszym laboratorium klinicznym oznaczanie antygenów makromolekularnych, takich jak HBsAg, alfa-fetoproteina (α-fetoproteina, αFP), antygen specyficzny dla prostaty (PSA), markery serii CA, hCG i hormony itp. Zasadniczo stosuje się metodę jednoetapową. W porównaniu z metodą dwuetapową, metoda jednoetapowa jest prosta w obsłudze, ale ma swoje nieodłączne wady. Jeśli nie zostanie dobrze potraktowany, wyniki testu immunologicznego typu sandwich z podwójnym przeciwciałem będą fałszywie ujemne lub mało ilościowe ze względu na istnienie efektu haka.

2. Test prawa konkurencji stacji roboczej ELISA

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The Stacja robocza ELISA can only use the competitive inhibition method.

W tym trybie testu należy uzyskać kombinację małych cząsteczek i enzymów. Przygotowanie koniugatów enzymów drobnocząsteczkowych nie jest tak proste, jak koniugatów enzymów przeciwciał, a jego oczyszczanie jest również dość trudne. Różnica masy cząsteczkowej między enzymem związanym z drobnymi cząsteczkami a wolnym enzymem jest niewielka i trudno jest ją rozdzielić przy użyciu ogólnych metod sita molekularnego. Dlatego niektórzy ludzie próbują ustalić metodę ELISA z podwójną konkurencją przeciwciał do oznaczania małych cząsteczek w oparciu o syntezę małych cząsteczek di-lub multimera. Poprawiono czułość i swoistość oznaczania.

3. Pośrednia metoda oznaczania przeciwciał w stacji roboczej ELISA

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the Zestaw do badania przeciwciał. Zanim trudno będzie uzyskać wysokiej czystości i dobrze zdefiniowane antygeny lub gdy antygeny są bardziej skomplikowane, na ogół stosuje się metodę pośrednią.

Obecnie powszechnie stosowane testy kliniczne przeciwciał wirusa zapalenia wątroby typu C (anty-HCV) są metodami pośrednimi, a metoda pośrednia służy do wykrywania przeciwciał. Ściśle mówiąc, mierzona jest tylko klasa przeciwciał IgG, a klasy IgM i IgA nie są zaangażowane. Jest to określone przez znakowane enzymem przeciwciało wtórne. Obecnie niektóre specyficzne zestawy do wykrywania przeciwciał IgOgólnie przyjmują metodę pośrednią.

4. Metoda kanapkowa podwójnego antygenu stacji roboczej ELISA

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the Stacja robocza ELISA has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. Prawo konkurencji stacji roboczej ELISA

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the Stacja robocza ELISA can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).