W zależności od różnicy w oznaczaniu antygenów i przeciwciał istnieje wiele automatycznych trybów pomiaru ELISA, takich jak metoda bezpośrednia, metoda pośrednia, metoda kanapkowa z podwójnym przeciwciałem (bezpośrednia, pośrednia), metoda hamowania konkurencyjnego (bezpośrednia, kanapkowa itp.), Metoda wychwytywania itp. W laboratoriach klinicznych, Powszechnie stosowane tryby pomiaru ELISA obejmują metodę kanapkową z podwójnym przeciwciałem, metodę pośrednią, metodę kanapkową z podwójnym antygenem, metodę hamowania konkurencyjnego i metodę wychwytywania.
W oznaczaniu antygenów najczęściej stosowanym trybem oznaczania białkowych antygenów makrocząsteczek jest metoda kanapkowa z podwójnym przeciwciałem. W przypadku małych cząsteczek z tylko pojedynczym epitopem stosuje się metodę hamowania konkurencyjnego; Oznaczanie przeciwciał zwykle wykorzystuje metodę pośrednią, metodę kanapkową z podwójnym antygenem, metodę hamowania konkurencyjnego i metodę wychwytywania.
1. Podwójna metoda kanapkowa przeciwciała stacji roboczej ELISA
W przypadku białek wielkocząsteczkowych zawierających wiele epitopów,Stacja robocza ELISAWykorzystuje metodę kanapkową z podwójnym przeciwciałem, aby określić, że jest to dość proste. Istniejące komercyjne zestawy do pomiaru antygenów białkowych zasadniczo przyjmują ten tryb pomiaru.
Wszystkie pierwsze w pełni automatyczne zestawy ELISA do wykrywania antygenów typu sandwich z podwójnym przeciwciałem przyjęły „ metodę dwuetapową ”. Później, aby skrócić czas wykrywania i uprościć etapy działania, producenci odczynników stopniowo wprowadzali „ jednoetapowy”Zestaw do badań medycznych.
Obecnie w naszym laboratorium klinicznym oznaczanie antygenów makromolekularnych, takich jak HBsAg, alfa-fetoproteina (α-fetoproteina, αFP), antygen specyficzny dla prostaty (PSA), markery serii CA, hCG i hormony itp. zasadniczo stosują metodę jednoetapową. W porównaniu z metodą dwuetapową, metoda jednoetapowa jest prosta w obsłudze, ale ma swoje nieodłączne wady. Jeśli nie zostanie dobrze potraktowany, wyniki testu immunologicznego typu sandwich z podwójnym przeciwciałem będą fałszywie ujemne lub mało ilościowe ze względu na istnienie efektu haka.
2. Test prawa konkurencji stacji roboczej ELISA
Hapteny małocząsteczkowe, takie jak digoksyna, teofilina i inne leki i hormony, takie jak T3, T4 i testosteron, mogą mieć tylko jeden epitop. Lub ponieważ cząsteczka jest zbyt mała, po związaniu z jednym przeciwciałem nie może wiązać się z innym przeciwciałem z powodu zawady sterycznej, więc do pomiaru nie można użyć metody sandwiczowej z podwójnym przeciwciałem. Stacja robocza ELISA może korzystać tylko z metody hamowania konkurencyjnego.
W tym trybie testu należy uzyskać kombinację małych cząsteczek i enzymów. Przygotowanie koniugatów enzymów drobnocząsteczkowych nie jest tak proste, jak koniugatów enzymów przeciwciał, a jego oczyszczanie jest również dość trudne. Różnica masy cząsteczkowej między enzymem związanym z drobnymi cząsteczkami a wolnym enzymem jest niewielka i trudno jest ją rozdzielić przy użyciu ogólnych metod sita molekularnego. Dlatego niektórzy ludzie próbują ustalić metodę ELISA z podwójną konkurencją przeciwciał do oznaczania małych cząsteczek w oparciu o syntezę małych cząsteczek di-lub multimera. Poprawiono czułość i swoistość oznaczania.
3. Pośrednia metoda oznaczania przeciwciał w stacji roboczej ELISA
Zmierz przeciwciała wytwarzane przez organizm przeciwko antygenom patogenu chorób zakaźnych, i to samo dotyczyZestaw do badania przeciwciał. Zanim trudno będzie uzyskać wysokiej czystości i dobrze zdefiniowane antygeny lub gdy antygeny są bardziej skomplikowane, na ogół stosuje się metodę pośrednią.
Obecnie powszechnie stosowane testy kliniczne przeciwciał wirusa zapalenia wątroby typu C (anty-HCV) są metodami pośrednimi, a metoda pośrednia służy do wykrywania przeciwciał. Ściśle mówiąc, mierzona jest tylko klasa przeciwciał IgG, a klasy IgM i IgA nie są zaangażowane. Jest to określone przez znakowane enzymem przeciwciało wtórne. Obecnie niektóre specyficzne zestawy do wykrywania przeciwciał Igędzie przyjmują metodę pośrednią.
4. Metoda kanapkowa podwójnego antygenu stacji roboczej ELISA
Przeciwciała mierzone metodą kanapkową z podwójnym antygenem obejmują wszystkie typy swoistych przeciwciał i nie są zakłócane przez niespecyficzne IgG. Dlatego czułość i swoistość metody kanapkowej podwójnego antygenu do wykrywania przeciwciał są wyższe niż metoda pośrednia. Obecnie, w celu poprawy czułości określania przeciwciał, zestaw stacji roboczej ELISA zasadniczo przyjął metodę kanapkową z podwójnym antygenem, z wyjątkiem tego, że anty-HCV jest bardziej skomplikowany ze względu na jego antygen.
5. Prawo konkurencji stacji roboczej ELISA
Oznaczanie przeciwciał na ogół nie wykorzystuje metody konkurencji. Gdy zanieczyszczenia w antygenie są trudne do usunięcia lub specyficzność wiązania antygenu jest niestabilna, stacja robocza ELISA może wykorzystać ten tryb do określenia przeciwciał. Najbardziej typowym przykładem jest oznaczanie rdzeniowego przeciwciała wirusa zapalenia wątroby typu B (HBcAb) i przeciwciała przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu B (HBeAb).
Wyślij do nas e-mail: